Plateforme de cristallisation de protéines

Le laboratoire de Chimie des Processus Biologiques possède des équipements de dernière génération pour la cristallisation des macromolécules biologiques. Un robot Mosquito® Crystal (TTPLabtech) permet le criblage automatisé des conditions de cristallisation en utilisant de faibles volumes d'échantillons. Cet appareil permet la réalisation de gouttes assises ou suspendues pour des expériences de diffusion de vapeurs ou des gouttes sous huile. Notre laboratoire est équipé d’un robot Dragonfly® (TTPLabtech) qui permet la réalisation de conditions de cristallisation personnalisées lors de la phase d’optimisation. Les expériences de cristallisation sont suivies à l’aide de deux stéréomicroscopes dont un LEICA M205C équipé d'une caméra IC80 HD.

Le laboratoire s’intéresse à la structure des protéines contenant des clusters [Fe-S] qui sont extrêmement sensibles à l'oxygène. Pour obtenir des cristaux de telles protéines, le laboratoire est équipé d’un système de cristallisation des macromolécules biologiques en condition anaérobie. Le système est composé de deux boîtes à gants dont une équipée avec un robot de cristallisation OryxNano (Douglas Instruments) permettant le criblage des conditions de cristallisation avec peu d’échantillon. L’OryxNano permet la réalisation d ‘expériences de diffusion de vapeur en gouttes assises ou des expériences de cristallisation sous huile. Le taux d’humidité dans la boîte est régulé entre 45 et 50%. Les expériences de cristallisations sont observées avec un stéréomicroscope LEICA M80 équipé d’une caméra IC80 HD.

Le laboratoire est également équipé d’appareils de biophysique pour la caractérisation des échantillons, notamment un spectromètre de dichroisme circulaire (ChirascanTM , Applied photophysics). Cet appareil permet de contrôler le repliement des protéines, estimer les structures secondaires et est utile pour les mesures de stabilité thermique. Un appareil de diffusion dynamique de la lumière (Malvern Zetasizer ZSP) permet le contrôle de la qualité des échantillons (estimation de la polydispersité), la mesure du rayon hydrodynamique, la stabilité des échantillons et la mesure de poids moléculaire et du second coefficient du viriel (A2). Un spectrophotomètre de fluorescence (Cary Eclipse) est également disponible.

Les robots Mosquito® et Dragonfly®

Les robots Mosquito® et Dragonfly®

Le stéréomicroscope LEICA M205C

Le stéréomicroscope LEICA M205C

Boîtes à gants - 1

Boîtes à gants dédiées à la cristallisation en anaérobie

Boîtes à gants - 2

Boîtes à gants dédiées à la cristallisation en anaérobie

Spectromètre de dichroisme circulaire

Spectromètre de dichroisme circulaire (ChirascanTM , Applied photophysics)

Appareil de diffusion dynamique de la lumière

 Appareil de diffusion dynamique de la lumière (Malvern Zetasizer ZSP).